Strain kit (3 strains) Pichia strain

3種のPichia株でそれぞれクチナーゼ（pD-912）を発現させた結果
GAPプロモータ（上部パネル）またはAOX1プロモータ（下部パネル）制御下でPPS-9010 (野生型)、PPS-9011 (aox1Δ (MutS)) およびPPS-9016 (pep1Δ, prb1Δ)の3種のPichia株においてクチナーゼ（pD-912）を発現させた。3種の株それぞれのコンピテントセルを作製し、45 ?lの細胞に5 ?lの開環したDNAを形質転換した。YPDS上で１時間培養後、1mg/mlのゼオシン添加YPDS上に播種し30℃で培養した。各菌株の形質転換体より2、3コロニーを選択し、BMGY培地（1% 酵母エキス, 2% ペプトン, 13.4 g/L YNB, 0.1 M KHPO4 pH 6, 1% グリセロール, 0.004 mg/L ビオチンおよび300 ?g/ml ゼオシン）で培養し、1日当たり10%グリセロールを3日間（GAP構築）または１日当たり0.5% (v/v)メタノールを２日間（AOX1構築）補充した。形質転換していない細胞をネガティブコントロールとし、 50 ?lのサンプルを毎日採取し、SDS PAGEでクチナーゼ発現を確認した。