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| 使用目的 |
従来カスパーゼ活性を測定するにはDEVD-R110や標識阻害物質であるFLICAを用いています。しかしDEVD-R11は細胞膜不浸透性のため細胞溶解が必要となり、生細胞内におけるカスパーゼ検出が不可能です。またFLICAにおいては細胞浸透性ではありますが、蛍光励起直後しかカスパーゼを測定で きません。NucViewTMは従来品とは異なる方法で生細胞中におけるカスパーゼ３の測定が可能となりました。本品は機能 性色素とカスパーゼ3の基質からなる複合体です。カスパーゼ３反応前は無色であり、負に帯電しているためDNAには結合しません。細胞膜透過性の NucViewTMはターゲット細胞に反応させると、細胞質内に移動します。ターゲット細胞内のカスパーゼ３とNucViewvが反応すると、複合体が開裂 しDNA結合性色素が遊離します。遊離したDNA色素は細胞核に移動し、核中のDNAに結合することで核を緑に染色します。同じアポトーシス細胞 郡内でもアポトーシス時期が異なることが知られています。本品および他の蛍光物質を併用し、蛍光顕微鏡またはフローサイトメトリーを用いて各々の現象をリ アルタイムに同時解析することで、細胞内における時空間的相互作用を解析することが可能となります。
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| 概要 |
This kit provides two apoptosis markers, our novel NucView® 488 Caspase-3 Substrate and Annexin V conjugated to red fluorescent sulforhodamine 101 dye (also known as Texas Red®), for profiling apoptotic cells and studying the relation of two important apoptosis events, caspase-3 activation and phosphatidylserine (PS) translocation. The rate of apoptosis varies from cell to cell even within the same population. As a result, various apoptotic events or markers accompanying the apoptotic process also occur differently among cells. Thus, it is important to be able to detect these apoptotic events on an individual cell basis. Traditionally, caspase activity has been detected either using a membrane-impermeable fluorogenic enzyme substrate such as DEVD-R110, or a fluorescently-labeled inhibitor such as a FLICA reagent. In the former case, cell lysis is required, thus precluding the detection of caspase activity in live cells. In addition, such caspase assays measure only the average caspase activity of a highly heterogeneous cell population at a given time. In the latter case, although a FLICA reagent can enter live cells to detect caspase activity, only the initial fluorescent signal following the application of the reagent can truly reflect the enzyme activity or the state of the apoptotic cells because any detected signal after the initial "snapshot" will need to consider the potential interference of the inhibitor to the enzyme and the apoptotic cell itself. Unlike conventional caspase assays, NucView® 488 Caspase-3 substrate detects caspase-3 activity within individual whole cells in a non-interfering manner. The substrate consists of a fluorogenic DNA dye and a DEVD substrate moiety specific for caspase-3. The substrate, which is both non-fluorescent and nonfunctional as a DNA dye, rapidly crosses cell membranes to enter the cytoplasm, where it is cleaved by caspase-3 to form a high-affinity DNA dye that stains the nucleus bright green. Thus, the NucView® 488 caspase-3 substrate is bi-functional, allowing detection of caspase-3 activity and visualization of apoptotic nuclear morphology. The kit contains reagents sufficient for 50 flow cytometry assays (200 uL assay volume). The number of fluorescence microscopy assays that can be performed with the kit may vary based on the size of culture vessel and staining volume used. See our full selection of NucView® substrates and kits. NucView® enzyme substrate technology is covered by U.S. patents. Texas Red is a registered trademark of Thermo Fisher Scientific.
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| 構成内容 |
・NucViewTM 488 Caspase-3 Substrate, 0.2 mM in DMSO
・Sulforhodamine 101-annexin V (Texas Red(R)-annexin V), 50ug/mL in TE buffer containing 0.1% BSA and 0.1% NaN3, pH 7.5
・5X Annexin V Binding Buffer
・Caspase-3 Inhibitor Ac-DEVD-CHO, 2 mM in DMSO
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| メーカー |
品番 |
包装 |
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BTI
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30030
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1 KIT
[50 - 250 assays]
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※表示価格について
| 当社在庫 |
なし
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| 納期目安 |
約10日
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| 保存温度 |
４℃禁凍結
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