Anti SUMO-2/3 Affinity Beads

図1 SUMO-2/3 抗体を用いた免疫沈降 以前に報告された方法に従い、HS43、CT37、KD S2（HS43： ヒートショック処理（43℃、10分間）、 CT37： 未処理、KD S2： shRNA SUMO-2 ノックダウン）から、細胞ライセートを調製した。細胞ライセート 1mg を使用して、SUMO-2/3 コンジュゲートの免疫沈降を行った。免疫沈降したタンパク質のウェスタンブロットには、抗 SUMO-2/3 抗体（品番： ASM23）（A）／抗 Ubc9 抗体（B）を使用した。ヒートショック処理した細胞中の SUMO-2/3 コンジュゲート量はコントロールより増加しており、shRNA SUMO-2 ノックダウンではコンジュゲート量が減少していた。SUMO-2/3 抗体（クローン 11G2）とビーズは化学的に結合されており、重鎖および軽鎖は検出されない。星印（＊）と丸印（○）は、抗体の重鎖および軽鎖の位置を示す。結合していないフリーのSUMOは、三角形で示す。（B）結合していない Ubc9 は、120kDa の近くに観察される。高分子量のバンドは、１分子の SUMO-2/3 タンパク質が Ubc9 に結合していることを示す。Ubc9 は、SUMO化のターゲットであることが報告されている。